El anticuerpo monoclonal de ratón Mob281, PDM245 y PDM245-10MM están diseñados contra p27KIP1 (clon: AE1 + AE3). Estos anticuerpos son adecuados para su uso en inmunohistoquímica cualitativa en secciones de tejidos fijados con formalina y embebidos en parafina, permitiendo su visualización por microscopía de luz. La interpretación clínica de los resultados de la tinción debe ser acompañada de estudios histológicos con los controles adecuados. Las historias clínicas de los pacientes y otras pruebas diagnósticas pertinentes deben ser utilizadas por una persona calificada para evaluar e interpretar los resultados.
Resumen y explicación: Este anticuerpo es específico de una proteína de 27 kDa conocida como p27KIP1, un célula inhibidor mitótico regulador del ciclo celular. Este anticuerpo reacciona en un 83-204 de p27. Es muy específico y no muestra ninguna reacción cruzada con otros inhibidores mitóticos. El p27KIP1 funciona como un regulador negativo de G1.
p27KIP1 es una proteína que funciona como un posible mediador de Parada de G1 inducida por TGF. El p27KIP1 es un candidato a supresor de tumores. La regulación hacia abajo del p27KIP1 se encuentra en muchos cánceres humanos, y la disminución de la expresión del p27KIP1 se asocia con un mal pronóstico en varios tumores, incluyendo pulmón, mama, colorrectal y próstata.
Formato: Este producto se suministra como una inmunoglobulina purificada y contiene azida sódica como conservante.
Principios de los procedimientos: La detección de antígeno por inmunohistoquímica (IHQ) es un proceso de dos etapas que implica, en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario contra el antígeno de interés, y segundo, la detección del anticuerpo unido por un cromógeno. El anticuerpo primario puede ser usado en IHQ, usando técnicas manuales o mediante el Sistema de tinción de Diagnostic BioSystems Automated Montage 360™.
Dilución del anticuerpo primario: Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems, han sido optimizados para utilizarlos con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio.
Los anticuerpos concentrados de Diagnostic BioSystems, deben diluirse de acuerdo con el procedimiento de tinción, cuando se utilicen con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado. El uso de cualquiera de los métodos de detección distintos a los sistemas y protocolos recomendados requiere validación por el usuario. Las diluciones de anticuerpos deben ajustarse apropiadamente y verificarse de acuerdo con el sistema de detección utilizado.
Materiales necesarios, pero no suministrados: Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHQ, no se proporcionan. Reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, reactivos de control y otros reactivos auxiliares, están disponibles en Diagnostic BioSystems. Por favor diríjase a la página web de Diagnostic BioSystems, www.dbiosys.com.
Almacenamiento y manipulación: Almacenar a 2-8°C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8°C. No utilice el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones distintas de las especificadas aquí, deben ser verificados por el usuario. Los reactivos diluidos deben utilizarse con prontitud. Las porciones no utilizadas de preparación de anticuerpos deben desecharse después de un día.
La presencia de precipitado o un olor inusual indica que el anticuerpo se deteriora y no se debe utilizar.
Recogida y preparación de muestras: Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para uso antes de la inclusión en parafina. Consultar las referencias (Kiernan, 1981: Sheehan y Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras.
Se recomienda al usuario validar el uso de los productos con sus muestras de tejido preparado y manipularlas de acuerdo con sus prácticas de laboratorio.
Precauciones: Este anticuerpo contiene menos del 0,1% de azida sódica. Las concentraciones de menos de 0,1% no son materiales peligrosos notificables según US 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva 91/155 / CE. El azida de sodio (NaN3) usado como un conservante es tóxico si se ingiere. El azida de sodio puede reaccionar con tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Tras la eliminación, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las cañerías. (Centro para el Control de Enfermedades, 1976, Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las muestras, antes y después de la fijación y todos los materiales expuestos a ellos, deben ser manejados como si fueran capaces de transmitir infecciones y desecharse con las precauciones adecuadas. Nunca pipetear reactivos con la boca y evitar el contacto con la piel y las membranas mucosas con los reactivos y muestras. Si los reactivos o muestras entran en contacto con zonas sensibles, lavar con cantidades copiosas de agua. La contaminación microbiana de los reactivos puede resultar en un aumento de la tinción no específica. Los tiempos de incubación o temperaturas diferentes de los especificados puede dar resultados erróneos. El usuario debe validar cualquier cambio. El MSDS está disponible bajo petición.
El tratamiento de los tejidos antes de la tinción: Colocar los portaobjetos en la solución de recuperación de antígeno recomendando usando el Sistema de recuperación de antígeno de Diagnostic BioSystems, Montage Opus™. Permitir enfriar las laminillas durante 20 minutos antes de la tinción.
Procedimiento de tinción: Consulte la siguiente tabla para obtener las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consulte el sistema de detección de Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus de dos pasos, o Sistema de Detección de Montage PolyVue Plus™ Auto para obtener orientación sobre los protocolos de tinción específicos u otros requisitos.
Parámetro:
- Control positivo: Carcinoma de colon, carcinoma de mama, amígdala
- Dilución del concentrado: 1:50 – 1:100
- El pretratamiento: EDTA Buffer pH 8.0
- Tiempo de incubación y temperatura: 30 min @ RT
- Sistema de Detección: Sistema de Detección de dos pasos PolyVue™ Plus o Sistema de detección automática Montage PolyVue Plus™ para usar con el Sistema Montage 360 / HighLighter
- Tipo de tejido: FFPE
Control de calidad: Consulte las Normas de Calidad del CLSI para el Diseño e Implementación de ensayos de inmunohistoquímica; Pauta aprobada Segunda edición (E / LA28-A2) CLSI Wayne, PA EE.UU. (www.clsi.org). 2011.
Solución de problemas: Contacto con el soporte técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2, techsupport@dbiosys.com o con su Distribuidor local para informar coloración inusual.
Localización celular: Nuclear
Limitaciones del procedimiento: La inmunohistoquímica es una técnica compleja que implica ambos métodos de detección histológicos e inmunológicos. El procesamiento de tejidos y la manipulación antes de la inmuno-tinción también puede causar resultados inconsistentes. Las variaciones en la fijación y la incrustación o de la naturaleza inherente del tejido pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o actividad pseudoperoxidasa en los eritrocitos y la biotina endógena pueden causar tinción no específica en función del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen superficie de la hepatitis B antígeno (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al, 1980). Una contra tinción y preparaciones inadecuadas pueden comprometer la interpretación de los resultados.
Características de presentación: La dilución optima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: la fijación, el método de recuperación de calor, los tiempos de incubación, y el espesor de sección de tejido y el kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos y los títulos de listados de incubación recomendados no son aplicables a otros sistemas de detección, ya que los resultados pueden variar. Las recomendaciones y los protocolos de hoja de datos se basan en el uso exclusivo de
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