CD30 / Ki-1 Antígeno Anticuerpo monoclonal de ratón

Anticuerpo monoclonal de Ratón Mob032 PDM018 PDM018-10MM

Documento: DS-0076-B Fecha efectiva: 01/09/2016

Inmunógeno: Línea de co-células establecida a partir de un paciente con la enfermedad de Hodgkin de linaje de células T. Clon: Ver-H2 Especie: Ratón Isotipo: IgG1, Kappa Diluyente Primario de anticuerpos: K004

La concentración de la específica del lote disponible a petición.

Catálogo

• Mob032: Anticuerpo concentrado para su uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos
• PDM018: Anticuerpo listo para usar, para uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos
• PDM018-10MM: Anticuerpo listo para usar con Diagnostic BioSystems Montage PolyVue Plus™ Sistema de Auto Detección & Montage™ Sistema 360

Uso previsto Para uso diagnóstico in vitro. Este producto está destinado para inmunohistoquímica cualitativa con secciones de tejidos, fijado con formalina, embebidos en parafina, normal y neoplásico para ser visto por microscopía de luz. La interpretación clínica de los resultados de la tinción debe ir acompañada de los estudios histológicos con los controles adecuados. Las historias clínicas de los pacientes y otras pruebas diagnósticas pertinentes deben ser utilizadas por una persona(s) calificada al evaluar e interpretar los resultados.

Resumen y explicación Este anticuerpo reconoce una glicoproteína de cadena simple de 105/120kDa, identificada como CD30/Ki-1. Su epítope se encuentra entre aa 12-412. CD30 se sintetiza como un precursor de 90kDa, que se expresa en la célula de Golgi en una glicoproteína madura fosforilada de 105/120kDa de reciente membrana. En la enfermedad de Hodgkin, el antígeno CD30/Ki-1 se expresa en múltiples células mononucleares de Hodgkin y células de Hodgkin multinucleadas. También lo expresan las células tumorales de la mayoría de los linfomas anaplásicos de células grandes derivados de células linfoides activadas de neoplasias histiocíticas y los derivados de células linfoides en reposo de los ganglios y carcinoma anaplásico. Alrededor de un tercio de los linfomas positivos para el Ki-1 carecen del leucocito común del antígeno/detección (CD45).

Formato Este producto se suministra como una inmunoglobulina purificada y contiene azida sódica como conservante.

Principios de los procedimientos La detección de antígeno por inmunohistoquímica (IHQ) es un proceso de dos etapas que implica en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario contra el antígeno de interés, y segundo, la detección del anticuerpo unido por un complejo enzimático. El anticuerpo primario puede ser usado en IHQ, usando técnicas manuales o mediante el Sistema de tinción de Diagnostic BioSystems Automatado Montage 360 ™.

Dilución del anticuerpo primario Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems, han sido optimizados para utilizarlos con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio.

Los anticuerpos concentrados de Diagnostic BioSystems, deben diluirse de acuerdo con el procedimiento de tinción, cuando se utilizan con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado. El uso de cualquiera de los métodos de detección distintos a los sistemas y protocolos recomendados requiere validación por el usuario. Las diluciones de anticuerpos deben ajustarse apropiadamente y verificarse de acuerdo con el sistema de detección utilizado.

Materiales necesarios, pero no suministrados Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHQ, no se proporcionan. Reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, reactivos de control y otros reactivos auxiliares, están disponibles con Diagnostic BioSystems. Por favor diríjase a la página web de Diagnostic BioSystems, www.dbiosys.com.

Almacenamiento y manipulación Almacenar a 2-8 °C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8 °C. No use el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones distintas de las especificadas aquí, deben ser verificados por el usuario. Los reactivos diluidos deben utilizarse con prontitud. Las porciones no utilizadas de preparación de anticuerpos deben desecharse después de su uso.

La presencia de precipitado o un olor inusual indica que el anticuerpo se deterioró y no se debe utilizar.

Los controles positivos y negativos se deben ejecutar simultáneamente con todas las muestras de pacientes. Si se observa una tinción inesperada no específica o una mayor variación en los parámetros dependientes de laboratorio y se sospecha un problema con el anticuerpo, póngase en contacto con Soporte Técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2 o techsupport@dbiosys.com.

Recogida y preparación de muestras Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para uso antes de la inclusión en parafina. Consultar las referencias (Kiernan, 1981; Sheehan y Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras.

Se recomienda al usuario validar el uso de los productos con sus muestras de tejido preparado y manipularlas de acuerdo con sus prácticas de laboratorio.

Precauciones Este anticuerpo contiene menos del 0,1% de azida sódica. Las concentraciones de menos de 0,1% no son materiales peligrosos notificables según los 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva 91/155 / CE. El azida de sodio (NaN3) usado como un conservante es tóxico si se ingiere. El azida de sodio puede reaccionar con tuberías de plomo y cobre para hacer azidas metálicas altamente explosivas. Tras la eliminación, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las cañerías. (Centro para el Control de Enfermedades, 1976; Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las muestras, antes y después de la fijación y todos los materiales expuestos a ellos, deben ser manejados como si fueran capaces de transmitir infecciones y desechar con las precauciones adecuadas. Nunca pipetear reacciones con la boca y evitar el contacto con la piel y las membranas mucosas con los reactivos y muestras. Si los reactivos o muestras entran en contacto con zonas sensibles, lavar con cantidades copiosas de agua. La contaminación microbiana de los reactivos puede resultar en un aumento de la tinción no específica. Los tiempos de incubación o temperaturas diferentes de los especificados puede dar resultados erróneos. El usuario debe validar cualquier cambio. El MSDS está disponible bajo petición.

El tratamiento de los tejidos antes de la tinción Colocar los portaobjetos en la solución de recuperación de antígeno recomendado usando el Sistema de recuperación de antígeno de Diagnostic BioSystems, Montage Opus™. Permitir enfriar las laminillas durante 20 minutos antes de la tinción.

Procedimiento de tinción Consulte la siguiente tabla para obtener las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consulte el sistema de detección de Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus de dos pasos, o Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus ™ Auto para obtener orientación sobre los protocolos de tinción específicos u otros requisitos.

Parámetro

• Control positivo: Linfoma de Hodgkin
• Dilución del concentrado: 1:50 – 1:100
• El pretratamiento: EDTA Buffer pH 8,0
• Tiempo de incubación y temperatura: 30 min @ RT
• Sistema de Detección: Sistema de Detección de dos pasos PolyVue™ Plus – o Sistema de detección automática Montage PolyVue Plus ™ para usar con el Sistema Montage 360
• Tipo de tejido: FFPE

Control de calidad Consulte las Normas de Calidad del CLSI para el Diseño e Implementación de ensayos de inmunohistoquímica; Pauta aprobada Segunda edición (E / LA28-A2) CLSI Wayne, PA EE.UU. (www.clsi.org). 2011.

Solución de problemas Contacte con el soporte técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2, techsupport@dbiosys.com o con su Distribuidor local para informar coloración inusual.

Localización celular Membrana celular.

Limitaciones del procedimiento La inmunohistoquímica es una técnica compleja que implica ambos métodos de detección histológicos e inmunológicos. El procesamiento de tejidos y la manipulación antes de la inmuno-tinción también puede causar resultados inconsistentes. Las variaciones de la fijación y la inclusión o de la naturaleza del antígeno de tejido pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o actividad pseudoperoxidasa en los eritrocitos y la biotina endógena pueden causar tinción no específica en función del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen superficie de la hepatitis B antígeno (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al, 1980). Una contraindicación y preparaciones inadecuadas pueden comprometer la interpretación de los resultados.

Características de presentación La dilución óptima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: la fijación, el método de recuperación de calor, los tiempos de incubación, y el espesor de sección de tejido y el kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos y los títulos de incubación recomendados no son aplicables a otros sistemas de detección, ya que los resultados pueden variar. Las recomendaciones y los protocolos de hoja de datos se basan en el uso exclusivo de los productos Diagnostic BioSystems. En última instancia, es responsabilidad del investigador determinar las condiciones óptimas. Estos productos son herramientas que pueden utilizarse para la interpretación de los resultados morfológicos en conjunto con otras pruebas de diagnóstico y los datos clínicos pertinentes por un patólogo cualificado.

Referencias

1. Schwarting R, Gerdes J, Dürkop H, Falini B, Pileri S, Stein H. Ber-H2: un nuevo anticuerpo monoclonal anti-Ki-1 (CD30) dirigido a un epítopo resistente al formol. Blood 1989; 74: 1678-89.