Mismatch Repair Protein 2, MSH2

El anticuerpo monoclonal de ratón Mismatch Repair Protein 2, MSH2 está diseñado para la detección de la proteína MSH2 en secciones de tejidos humanos fijados en formol y embebidos en parafina. Este anticuerpo se utiliza en inmunohistoquímica (IHQ) para identificar la proteína MSH2, que es crucial en la reparación de errores de emparejamiento de ADN. Las mutaciones en los genes de reparación de errores de emparejamiento como MSH2 están asociadas con síndromes de cáncer hereditario, incluyendo el cáncer colorrectal hereditario no polipósico (HNPCC). MSH2 es esencial para mantener la estabilidad genética y prevenir la proliferación celular descontrolada.

Disponible en los siguientes formatos:

• Mob585: Anticuerpo concentrado para uso con el sistema Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos.
• PDM585: Anticuerpo listo para usar con el sistema Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos.
• PDM585-HL: Anticuerpo listo para usar en viales etiquetados con RFID para su uso en el sistema de tinción HighLighter.

Uso previsto: Para uso diagnóstico in vitro. Este producto está destinado para inmunohistoquímica cualitativa con secciones de tejidos, fijados con formol, embebidos en parafina, normal y neoplásicos para ser visto por microscopía de luz. La interpretación clínica de los resultados de la tinción debe ir acompañada de los estudios histológicos con los controles adecuados. Las historias clínicas de los pacientes y otras pruebas diagnósticas pertinentes deben ser utilizadas por una persona calificada al evaluar e interpretar los resultados.

Resumen y explicación: Las mutaciones en los genes de reparación de errores de emparejamiento del ADN están asociadas con el cáncer colorrectal hereditario no polipósico (HNPCC). Inicialmente, se descubrieron mutaciones en los genes MSH2 y MLH1 en HNPCC y se observó que las mutaciones en MSH2 y Mutt estaban presentes con alta frecuencia en HNPCC y mostraron estar asociadas con inestabilidad de microsatélites. La demostración de la pérdida de MSH2 en tumores de páncreas, gástrico, mama, ovario, colon y pulmón pequeño de células está vinculada a la inestabilidad de microsatélites. Este anticuerpo se suministra como inmunoglobulina purificada y contiene azida sódica como conservante.

Formato: Este producto se suministra como una inmunoglobulina purificada y contiene azida sódica como conservante.

Principios de los procedimientos: La detección de antígeno por inmunohistoquímica (IHQ) es un proceso de dos etapas que implica en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario contra el antígeno de interés, y segundo, la detección del anticuerpo unido por un cromógeno. El anticuerpo primario puede ser usado en IHQ, usando técnicas manuales o mediante el Sistema de tinción de Diagnostic BioSystems Automated Montage 360™ o el sistema de tinción HighLighter.

Dilución del anticuerpo primario: Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems han sido optimizados para utilizarlos con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio.

Los anticuerpos concentrados de Diagnostic BioSystems deben diluirse de acuerdo con el procedimiento de tinción cuando se utilizan con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado. El uso de cualquiera de los métodos de detección distintos a los sistemas y protocolos recomendados requiere validación por el usuario. Las diluciones de anticuerpos deben ajustarse apropiadamente y verificarse de acuerdo con el sistema de detección utilizado.

Materiales necesarios, pero no suministrados: Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHQ no se proporcionan. Reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, reactivos de control y otros reactivos auxiliares están disponibles en Diagnostic BioSystems. Por favor diríjase a la página web de Diagnostic BioSystems, www.dbiosys.com.

Almacenamiento y manipulación: Almacenar a 2-8°C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8°C. No utilice el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones distintas de las especificadas aquí, deben ser verificados por el usuario. Los reactivos diluidos deben utilizarse con prontitud. Las porciones no utilizadas de preparación de anticuerpos deben desecharse después de un día.

La presencia de precipitado o un olor inusual indica que el anticuerpo se deteriora y no se debe utilizar.

Recogida y preparación de muestras: Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para uso antes de la inclusión en parafina. Consultar las referencias (Kiernan, 1981; Sheehan y Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras.

Se recomienda al usuario validar el uso de los productos con sus muestras de tejido preparado y manipularlas de acuerdo con sus prácticas de laboratorio.

Precauciones: Este anticuerpo contiene menos del 0,1% de azida sódica. Las concentraciones de menos de 0,1% no son materiales peligrosos notificables según US 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva 91/155/CE. El azida de sodio (NaN3) usado como un conservante es tóxico si se ingiere. El azida de sodio puede reaccionar con tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Tras la eliminación, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las cañerías (Centro para el Control de Enfermedades, 1976; Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las muestras, antes y después de la fijación y todos los materiales expuestos a ellos, deben ser manejados como si fueran capaces de transmitir infecciones y desecharse con las precauciones adecuadas. Nunca pipetear reactivos con la boca y evitar el contacto con la piel y las membranas mucosas con los reactivos y muestras. Si los reactivos o muestras entran en contacto con zonas sensibles, lavar con cantidades copiosas de agua. La contaminación microbiana de los reactivos puede resultar en un aumento de la tinción no específica. Los tiempos de incubación o temperaturas diferentes de los especificados pueden dar resultados erróneos. El usuario debe validar cualquier cambio. El MSDS está disponible bajo petición.

El tratamiento de los tejidos antes de la tinción: Colocar los portaobjetos en la solución de recuperación de antígeno recomendada usando el Sistema de recuperación de antígeno de Diagnostic BioSystems, Montage Opus™. Permitir enfriar las laminillas durante 20 minutos antes de la tinción.

Procedimiento de tinción: Consulte la siguiente tabla para obtener las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consulte el sistema de detección de Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus de dos pasos, o Sistema de Detección de Montage PolyVue Plus™ Auto para obtener orientación sobre los protocolos de tinción específicos u otros requisitos.

Parámetro	Recomendaciones Diagnostic BioSystems
Control positivo	Amígdala
Dilución del concentrado	1:50 – 1:100
El pretratamiento	EDTA Buffer pH 8.0 (Manual/Montage)
Pretratamiento para HL	Tris-EDTA Buffer pH 9.0 (EAI, K102-HL)
Tiempo de incubación y temperatura	30 min @ RT
Sistema de Detección	Sistema de Detección de dos pasos PolyVue™ Plus – Sistema de Detección automática Montage PolyVue Plus™ para usar con el Sistema Montage 360™ o Highlighter core kit para Highlighter Staining System
Tipo de tejido	FFPE

Control de calidad: Consulte las Normas de Calidad del CLSI para el Diseño e Implementación de ensayos de inmunohistoquímica; Pauta aprobada Segunda edición (E / LA28-A2) CLSI Wayne, PA EE.UU. (www.clsi.org). 2011.

Localización celular: Nuclear

Limitaciones del procedimiento: La inmunohistoquímica es una técnica compleja que implica métodos de detección tanto histológicos como inmunológicos. El procesamiento y manejo de los tejidos antes de la inmunotinción también pueden causar resultados inconsistentes. Las variaciones en la fijación e inclusión o la naturaleza inherente del tejido pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o pseudoperoxidasa en los eritrocitos y la biotina endógena pueden causar tinción no específica dependiendo del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen antígeno de superficie de la Hepatitis B (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al, 1980). La contra tinción y el montaje inadecuados pueden comprometer la interpretación de los resultados.

Características de rendimiento: La dilución óptima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: fijación, método de recuperación de calor, tiempos de incubación, espesor de las secciones de tejido y el kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos de incubación y los títulos recomendados no son aplicables a otros sistemas de detección, ya que los resultados pueden variar. Las recomendaciones y protocolos de la hoja de datos se basan en el uso exclusivo de los productos de Diagnostic BioSystems. En última instancia, es responsabilidad del investigador determinar las condiciones óptimas. Estos productos son herramientas que pueden utilizarse para la interpretación de hallazgos morfológicos junto con otras pruebas diagnósticas y datos clínicos pertinentes por un patólogo calificado.