Inmunógeno: Topoisomerasa humana recombinante II alpha fragmento (aa1352-1493).
Formato:
- Mob511 – Anticuerpo concentrado para su uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos.
- PDM246 – Anticuerpo listo para usar con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Más – Sistema de detección de dos pasos.
- PDM246-10MM – Anticuerpo con código de barras listo para usar con Diagnostic BioSystems Montage PolyVue Plus™ – Sistema de Auto Detección & Montage™ Sistema 360 / HighLighter.
Uso previsto: Para uso diagnóstico in vitro. Este producto está destinado para inmunohistoquímica cualitativa con secciones de tejidos, fijado con formalina, embebidos en parafina, normal y neoplásico para ser visto por microscopía de luz. La interpretación clínica de los resultados de la tinción debe ir acompañada de los estudios histológicos con los controles adecuados. Las historias clínicas de los pacientes y otras pruebas diagnósticas pertinentes deben ser utilizadas por una persona(s) calificada al evaluar e interpretar los resultados.
La topoisomerasa II (topo II) es un componente de la maquinaria del ADN con una masa molecular de 170 kDa que está intrínsecamente involucrada en muchos niveles del metabolismo del ADN. Su función principal es alterar la topología del ADN desde su forma de almacenamiento (superenrollada) a una forma expandida (parcialmente desenrollada) incluyendo roturas de una cadena en aplicaciones de entrecruzamiento doble intacto hasta el alivio de la brecha. El topo II se expresa en la proliferación de células en S1 y con un pico en las fases G2/M, donde se cree que es el marcador primario de la condensación de cromosomas. La topoisomerasa II alpha también se ha implicado en la resistencia a las drogas de las células tumorales.
Principios de los procedimientos: La detección de antígeno por inmunohistoquímica (IHQ) es un proceso de dos etapas que implica en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario contra el antígeno de interés, y segundo, la detección del anticuerpo unido por un cromógeno. El anticuerpo primario puede ser usado en IHQ, usando técnicas manuales o mediante el Sistema de tinción de Diagnostic BioSystems Automated Montage 360™.
Dilución del anticuerpo primario: Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems, han sido optimizados para utilizarlos con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio.
Almacenamiento y manipulación: Almacenar a 2-8°C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8°C. No utilice el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones distintas de las especificadas aquí, deben ser verificados por el usuario. Los reactivos diluidos deben utilizarse con prontitud. Las porciones no utilizadas de preparación de anticuerpos deben desecharse después de un día.
Materiales necesarios, pero no suministrados: Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHQ, no se proporcionarán. Reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, reactivos de control y otros reactivos auxiliares, están disponibles con Diagnostic BioSystems. Por favor dirigirse a la página web de Diagnostic BioSystems, www.dbiosys.com.
Recogida y preparación de muestras: Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para uso antes de la inclusión en parafina. Consultar las referencias (Kiernan, 1981: Sheehan y Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras.
Se recomienda al usuario validar el uso de los productos con sus muestras de tejido preparado y manipularlas de acuerdo con sus prácticas de laboratorio.
Precauciones: Este anticuerpo contiene menos de 0,1% de azida sódica. Las concentraciones de menos de 0,1% no son materiales peligrosos notificables según US 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva 91/155 / CE. El azida de sodio (NaN3) usado como un conservante es tóxico si se ingiere. El azida de sodio puede reaccionar con tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Tras la eliminación, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las cañerías. (Centro para el Control de Enfermedades, 1976, Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las muestras, antes y después de la fijación y todos los materiales expuestos a ellos, deben ser manejados como si fueran capaces de transmitir infecciones y desecharse con las precauciones adecuadas. Nunca pipetear reactivos con la boca y evitar el contacto con la piel y las membranas mucosas con los reactivos y muestras. Si los reactivos o muestras entran en contacto con zonas sensibles, lavar con cantidades copiosas de agua. La contaminación microbiana de los reactivos puede resultar en un aumento de la tinción no específica. Los tiempos de incubación o temperaturas diferentes de los especificados puede dar resultados erróneos. El usuario debe validar cualquier cambio. El MSDS está disponible bajo petición.
El tratamiento de los tejidos antes de la tinción: Colocar los portaobjetos en la solución de recuperación de antígeno recomendada usando el Sistema de recuperación de antígeno de Diagnostic BioSystems, Montage Opus™. Permitir enfriar las laminillas durante 20 minutos antes de la tinción.
Procedimiento de tinción: Consulte la siguiente tabla para obtener las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consulte el sistema de detección de Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus de dos pasos, o Sistema de Detección de Montage PolyVue Plus™ Auto para obtener orientación sobre los protocolos de tinción específicos u otros requisitos.
Parámetro: Recomendaciones Diagnostic BioSystems
Control positivo: Amígdala, Colon
Dilución del concentrado: 1:50 – 1:100
El pretratamiento: EDTA Buffer pH 8.0
Tiempo de incubación y temperatura: 30 min @ RT
Sistema de Detección: Sistema de Detección de dos pasos PolyVue™ Plus – o Sistema de detección automática Montage PolyVue Plus™ para usar con el Sistema Montage 360 / HighLighter
Tipo de tejido: FFPE
Control de calidad: Consulte las Normas de Calidad del CLSI para el Diseño e Implementación de ensayos de inmunohistoquímica; Pauta aprobada Segunda edición (E / LA28-A2) CLSI Wayne, PA EE.UU. (www.clsi.org). 2011.
Localización celular: Nuclear
Limitaciones del procedimiento: La inmunohistoquímica es una técnica compleja que implica ambos métodos de detección histológicos e inmunológicos. El procesamiento de tejidos y la manipulación antes de la inmuno-tinción también puede causar resultados inconsistentes. Las variaciones en la fijación y la incrustación o de la naturaleza inherente del tejido pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o actividad pseudo peroxidasa en los eritrocitos y la biotina endógena pueden causar tinción no específica en función del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen superficie de la hepatitis B antígeno (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al, 1980). Una contra tinción y preparaciones inadecuadas pueden comprometer la interpretación de los resultados.
Características de presentación: La dilución óptima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: la fijación, el método de recuperación de calor, los tiempos de incubación, y el espesor de sección de tejido y el kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos y los títulos de listados de incubación recomendados no son aplicables a otros sistemas de detección, ya que los resultados pueden variar. Las recomendaciones y los protocolos de hoja de datos se basan en el uso exclusivo de los productos Diagnostic BioSystems. En última instancia, es responsabilidad del investigador el determinar las condiciones óptimas. Estos productos son herramientas que pueden utilizarse para la interpretación de los resultados morfológicos en conjunción con otras pruebas de diagnóstico y los datos clínicos pertinentes por un patólogo calificado.
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