Uroplakin III – Anticuerpo Monoclonal de Ratón, Mob594, PDM594. Esta hoja de datos es aplicable a todos los tamaños (volumen) del producto. El volumen real se indica en el vial o frasco. Documento: DS-0660-A. Fecha efectiva: 1/11/2021.
Inmunógeno: Generado en ratón usando una preparación de AUM de la vejiga urinaria bovina como inmunógeno. Clone: AU1. Especie: Ratón. Isotipo: IgG1. Diluyente Primario de Anticuerpos: K004. La concentración específica de Ig está disponible bajo solicitud.
Catálogo: Mob594. Descripción: Anticuerpo concentrado para su uso con el Sistema de Detección de Dos Pasos PolyVue™ Plus de Diagnostic BioSystems. Catálogo: PDM594. Descripción: Anticuerpo listo para usar con el Sistema de Detección de Dos Pasos PolyVue™ Plus de Diagnostic BioSystems.
Uso Previsto: Para uso diagnóstico in vitro. Este producto está destinado para inmunohistoquímica cualitativa con secciones de tejidos normales y neoplásicos fijados con formalina e incluidos en parafina, para ser vistos por microscopía de luz. La interpretación clínica de los resultados de la tinción debe estar acompañada por estudios histológicos con controles adecuados. Las historias clínicas de los pacientes y otras pruebas diagnósticas relevantes deben ser utilizadas por una persona(s) calificada al evaluar e interpretar los resultados.
Resumen y Explicación: Los uroplakins (UPs) son una familia de proteínas transmembrana (UPs Ia, Ib, II y III) que son productos de diferenciación específicos de las células uroteliales. En el urotelio mamífero no neoplásico, los UPs se expresan en la membrana plasmática de la superficie luminal de las células superficiales (umbrella), formando complejos de partículas cristalinas de 16 nm. UP III es específico para tumores de origen urotelial y, cuando se usa en combinación con otros marcadores, puede ayudar en el diagnóstico de tumores primarios y metastásicos.
Formato: Este producto se suministra como un sobrenadante de cultivo de tejidos y contiene azida sódica como conservante.
Principios del Procedimiento: La detección de antígenos por inmunohistoquímica (IHQ) es un proceso de dos pasos que implica primero, la unión de un anticuerpo primario al antígeno de interés, y segundo, la detección del anticuerpo unido por un cromógeno. El anticuerpo primario puede usarse en IHQ mediante técnicas manuales o usando el Sistema Automatizado de Tinción Montage 360™ de Diagnostic BioSystems.
Dilución del Anticuerpo Primario: Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems han sido optimizados para su uso con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio.
Los anticuerpos concentrados de Diagnostic BioSystems deben diluirse de acuerdo con el procedimiento de tinción cuando se usan con el sistema de detección recomendado de Diagnostic BioSystems. El uso de cualquier método de detección diferente a los sistemas y protocolos recomendados requiere validación por el usuario. Las diluciones de anticuerpos deben ajustarse adecuadamente y verificarse según el sistema de detección utilizado.
Materiales Necesarios pero No Proporcionados: Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHQ no se proporcionan. Reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, reactivos de control y otros reactivos auxiliares están disponibles en Diagnostic BioSystems. Por favor, consulte la página web de Diagnostic BioSystems en www.dbiosys.com.
Almacenamiento y Manejo: Almacenar a 2-8°C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad indicada en el vial cuando se almacena a 2-8°C. No utilice el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones distintas a las especificadas aquí, deben ser verificados por el usuario. Los reactivos diluidos deben usarse con prontitud. Las porciones no utilizadas de la preparación de anticuerpos deben desecharse después de un día. La presencia de precipitado o un olor inusual indica que el anticuerpo se está deteriorando y no debe usarse.
Los controles positivos y negativos deben ejecutarse simultáneamente con todas las muestras de pacientes. Si se observa una tinción inesperada que no puede explicarse por variaciones en los procedimientos de laboratorio y se sospecha un problema con el anticuerpo, póngase en contacto con el Soporte Técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2 o techsupport@dbiosys.com.
Recogida y Preparación de Muestras: Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para su uso antes de la inclusión en parafina. Consulte las referencias (Kiernan, 1981: Sheehan & Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras. Se aconseja al usuario validar el uso de los productos con sus muestras de tejido preparadas y manejadas de acuerdo con sus prácticas de laboratorio.
Precauciones: Este anticuerpo contiene menos del 0.1% de azida sódica. Las concentraciones menores al 0.1% no son materiales peligrosos según US 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva 91/155/CE. El azida sódica (NaN3) usado como conservante es tóxico si se ingiere. La azida sódica puede reaccionar con tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Tras la eliminación, enjuague con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las tuberías (Centro para el Control de Enfermedades, 1976, Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las muestras, antes y después de la fijación, y todos los materiales expuestos a ellas, deben ser manejados como si fueran capaces de transmitir infecciones y desecharse con las precauciones adecuadas. Nunca pipetee reactivos con la boca y evite el contacto con la piel y las membranas mucosas con los reactivos y muestras. Si los reactivos o muestras entran en contacto con áreas sensibles, lavar con grandes cantidades de agua. La contaminación microbiana de los reactivos puede resultar en tinción incorrecta. Tiempos de incubación o temperaturas diferentes a las especificadas pueden dar resultados erróneos. El usuario debe validar cualquier cambio. El MSDS está disponible bajo solicitud.
Tratamiento de los Tejidos Antes de la Tinción: Colocar las láminas en la solución de recuperación de antígeno recomendada usando el Sistema de Recuperación de Antígenos Montage Opus™ de Diagnostic BioSystems. Permitir que las láminas se enfríen durante 20 minutos antes de la tinción.
Procedimiento de Tinción: Consulte la siguiente tabla para las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consulte el Sistema de Detección de Dos Pasos PolyVue™ Plus de Diagnostic BioSystems o el Sistema de Detección Automática PolyVue Plus™ para el Sistema Montage 360 para orientación sobre protocolos de tinción específicos u otros requisitos.
Parámetro: Control positivo. Recomendaciones Diagnostic BioSystems: Vejiga. Parámetro: Dilución concentrada. Recomendaciones Diagnostic BioSystems: 1:50-1:100. Parámetro: Pretratamiento. Recomendaciones Diagnostic BioSystems: Buffer EDTA pH 8.0. Parámetro: Tiempo de incubación y temperatura. Recomendaciones Diagnostic BioSystems: 30 min @ RT. Parámetro: Sistema de detección. Recomendaciones Diagnostic BioSystems: Sistema de Detección de Dos Pasos PolyVue™ Plus o Sistema de Detección Automática PolyVue Plus™ para el Sistema Montage 360. Parámetro: Tipo de tejido. Recomendaciones Diagnostic BioSystems: FFPE.
Control de Calidad: Consulte las Normas de Calidad del CLSI para el Diseño e Implementación de Ensayos de Inmunohistoquímica; Pauta Aprobada Segunda Edición (I/LA28-A2) CLSI Wayne, PA EE.UU. (www.clsi.org). 2011.
Solución de Problemas: Contacte al Soporte Técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2, techsupport@dbiosys.com o a su distribuidor local para reportar tinción inusual.
Localización Celular: Citoplasmática y de Membrana
Limitaciones del Procedimiento: La inmunohistoquímica es una técnica compleja que implica tanto métodos de detección histológicos como inmunológicos. El procesamiento y manejo de los tejidos antes de la inmunotinción también puede causar resultados inconsistentes. Las variaciones en la fijación y en la inclusión o la naturaleza inherente del tejido pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad peroxidasa endógena o la actividad pseudoperoxidasa en los eritrocitos y la biotina endógena pueden causar tinción inespecífica dependiendo del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen el Antígeno de Superficie de la Hepatitis B (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al, 1980). La contracoloración y el montaje inadecuados pueden comprometer la interpretación de los resultados.
Características del Desempeño: La dilución óptima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: fijación, método de recuperación de calor, tiempos de incubación, grosor de la sección de tejido y kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos de incubación y títulos listados no son aplicables a otros sistemas de detección y deben ser validados por el usuario. Las recomendaciones y protocolos de la hoja de datos se basan en el uso exclusivo de los productos de Diagnostic BioSystems. Se aconseja al usuario titular el anticuerpo para determinar las condiciones óptimas. Estos productos son herramientas que pueden ser utilizadas para la interpretación de hallazgos morfológicos en conjunto con otras pruebas de diagnóstico y datos clínicos pertinentes por un patólogo calificado.
Referencias:
- Moll R, et al. Uroplakins, specific membrane proteins of urothelial umbrella cells, as histological markers of metastatic transitional cell carcinomas. Am J Pathol. 1995; 147:1383-97.
- Olsburgh J, et al. Uroplakin gene expression in normal human tissues and locally advanced bladder cancer. J Pathol. 2003; 199:41-9.
- Parker DC, et al. Potential utility of uroplakin III, thrombomodulin, high molecular weight cytokeratin and cytokeratin 20 in noninvasive, invasive, and metastatic urothelial (transitional cell) carcinomas. Am J Surg Pathol. 2003; 27:1-10.
- Ohtsuka Y, et al. Loss of uroplakin III expression is associated with a poor prognosis in patients with urothelial carcinoma of the upper urinary tract. BJU Int. 2006; 97:1322-6.
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